PCR聚合酶鏈反應(yīng)(基因擴增):基本原理類似于DNA的天然復(fù)制過程,其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。簡單的說,PCR就是模擬體內(nèi)DNA復(fù)制過程,在體外特異性擴增DNA片段的一種技術(shù)。
根據(jù)DNA擴增的目的和檢測的標(biāo)準(zhǔn)可以將PCR儀分為普通PCR儀,梯度PCR儀,原位PCR,實時熒光定量PCR儀等幾類。
1、普通PCR儀
一般把一次PCR擴增只能運行一個特定退火溫度的PCR儀,稱之為普通PCR儀。如果要用它做不同的退火溫度則需要多次運行。主要是用作簡單的,對目的基因退火溫度的擴增。
2、梯度PCR儀
一次性PCR擴增可以設(shè)置一系列不同的退火溫度條件(通常12種溫度梯度)的稱之為梯度PCR儀。因為被擴增的不同的DNA片段其適合的退火溫度不同,通過設(shè)置一系列的梯度退火溫度進行擴增,從而一次性PCR擴增就可以篩選出表達量高的適合退火溫度進行有效的擴增。主要用于研究未知DNA退火溫度的擴增,這樣既節(jié)約時間,也節(jié)約經(jīng)費。在不設(shè)置梯度的情況下亦可當(dāng)做普通的PCR用。
3、原位PCR儀
是用于從細胞內(nèi)靶DNA的定位分析的細胞內(nèi)基因擴增儀。如病原基因在細胞的位置或目的基因在細胞內(nèi)的作用位置等??杀3旨毎蚪M織的完整性,使PCR反應(yīng)體系滲透到組織和細胞中,在細胞的靶DNA所在的位置進行基因擴增。不但可以檢測到靶DNA,還能標(biāo)出靶序列在細胞內(nèi)的位置。于分子和細胞水平上研究疾病的發(fā)病機理和臨床過程及病理的轉(zhuǎn)變有著重大的實用價值。
4、實時熒光定量PCR儀
在普通PCR儀基礎(chǔ)上增加一個熒光信號采集系統(tǒng)和計算機分析處理系統(tǒng),就成了熒光定量PCR。其PCR擴增原理和普通PCR擴增原理相同,只是在PCR擴增時加入的引物是利用同位素、熒光素等進行標(biāo)記,使用引物和熒光探針同時與模板特異性結(jié)合擴增。擴增的結(jié)果通過熒光信號采集系統(tǒng)實時采集信號連接輸送到計算機分析處理系統(tǒng),得出量化的實時結(jié)果輸出。